以感病泡桐组培苗提取的DNA为模板,采用PCR方法扩增pPaWBNy-2-ORF4的部分片段。将目的片段克隆到原核表达载体pGEX-4T-3,重组质粒pGEX-p2ORF4转化大肠杆菌Rosseta(DE3)菌株。IPTG诱导表达,分子量约为38 kDa的含GST标签的融合蛋白得到表达。切胶回收目的蛋白,免疫大白兔制备抗血清。间接ELISA测定抗血清的效价约为1: 4 096,免疫印迹实验显示:抗血清能够与原核表达的GST融合蛋白发生特异的免疫反应,与pPaWBNy-1-ORF5的原核表达蛋白无明显的交叉反应。利用制备的抗血清,在感病泡桐饲毒的茶翅蝽中检测到分子量约为18 kDa的蛋白条带,而在无菌茶翅蝽和感病泡桐组培苗中均未检测到,表明pPaWBNy-2-ORF4在饲毒的茶翅蝽中表达,而在感病泡桐组培苗中未表达或表达量低于检测水平。据此推测,该基因参与茶翅蝽传播泡桐丛枝植原体。

胸苷酸激酶是dTTP从头合成和补救途径的关键酶,催化dTMP形成dTDP,在DNA复制和生物的生存中发挥着必不可少的作用. 本文在前期研究的基础上,对从泡桐丛枝(PaWB)植原体中获得的的3个同源蛋白TMK-a-1、TMK-a-2及TMK-b与已报道的小麦蓝矮(WBD)、洋葱黄化(OY-W)植原体的TMK-a、TMK-b的氨基酸序列进行了比对和相似性分析,结果显示PaWBPS TMK-b与WBD TMK-2和OY-W TMK-b之间的相似性分别为95.65%和99.03%;PaWBPS TMK-a-1与PaWBPS TMK-a-2的相似性为90.57%,且二者与WBD TMK-1和OY-W TMK-a之间的相似性为87.32%-94.26%;而PaWBPS、WBD、OY-W三种植原体的TMK-a与TMK-b之间的相似性仅为22.22%-25.95%. 构建了PaWBPS TMK-b、TMK-a-1、TMK-a-2的pET28a原核表达载体,对PaWBPS TMK-b、TMK-a-1、TMK-a-2 3种蛋白进行了原核表达,经Ni-NTA柱纯化后,利用双酶法进行了胸苷酸激酶催化活性测定,结果表明,PaWBPS TMK-b具有较高的胸苷酸激酶活性,为85.96±0.74 U·mg-1,而PaWBPS TMK-a-1和TMK-a-2几乎没有胸苷酸激酶活性. 本文为进一步研究胸苷酸激酶在植原体繁殖过程中的作用机理奠定了基础.

目的 筛选刚竹泰广肩小蜂和竹泰广肩小蜂植物源引诱剂，优化影响诱捕效果的因素，为2种早竹造瘿害虫植物源诱控技术的应用提供技术支撑。 方法 采用林间生物测定法比较7种候选引诱剂的引诱效果，比较3种悬挂高度和5种诱捕器类型对诱捕效果的影响，并监测刚竹泰广肩小蜂和竹泰广肩小蜂林间的种群动态。 结果 水杨酸甲酯原液、顺-3-己烯-1-醇原液和反-2-己烯醛1 000倍液作为引诱剂的诱捕器诱捕刚竹泰广肩小蜂数量分别为154.40±129.04、35.20±35.75、24.00±20.30头，显著高于对照组诱捕器的诱虫量（P<0.05）。反-2-己烯醛1 000倍液、顺-3-己烯-1-醇10 000倍液和β-紫罗兰酮1 000倍液作为引诱剂的诱捕器诱捕竹泰广肩小蜂数量分别为29.50±28.43、25.67±16.26、20.25±3.95头，显著高于对照组诱捕器的诱虫量（P<0.05）。冠层的上层和中层诱捕造瘿害虫的数量显著多于冠层的下层（P<0.05），而冠层的上层和中层诱捕造瘿害虫的数量差异不显著（P>0.05）。不同类型诱捕器诱捕造瘿害虫的数量差异显著（P<0.05），小船型诱捕器的诱虫量显著多于三角形诱捕器的诱虫量（P<0.05），而三角形诱捕器的诱虫量显著多于桶型诱捕器（P<0.05）、实蝇诱捕器（P<0.05）和夜蛾诱捕器的诱虫量（P<0.05）。 结论 4月下旬到5月上旬，使用水杨酸甲酯与顺-3-己烯-1-醇30:1比例的混合物作为引诱剂，在早竹冠层的中层或上层悬挂小船型诱捕器，能够诱捕到更多的刚竹泰广肩小蜂和竹泰广肩小蜂。

目的 建立山茶种质资源花腐病抗性评价技术，评价山茶种质资源对花腐病的抗性水平。 方法 采用3份抗性不同的种质资源设置时间梯度，分析接种山茶叶杯菌菌丝块后不同培养时间对抗性评价的影响；计算接菌后山茶种质资源病斑的相对面积和病情指数，制定花腐病病情严重度的分级标准和抗性评判标准，建立山茶种质资源花腐病抗性评价技术；利用该技术评价56份种质资源对花腐病的抗性。 结果 接种菌丝块于山茶种质资源的离体花瓣，并在接菌后72 h统计病斑的相对面积，能准确地对山茶种质资源进行抗病性评价。56份种质资源抗性评价结果表明，8份种质资源为免疫或高抗花腐病、24份种质资源为中抗、14份种质资源为中感、10份种质资源为高感。山茶属不同组间种质资源的抗性水平不同，同一组内不同种间以及同一亲本的不同杂交组合之间的抗性水平也有差异。 结论 本研究建立了山茶花腐病抗性评价技术，明确了56份山茶种质资源花腐病的抗性水平，筛选出了8份免疫或高抗花腐病的种质资源。

目的 筛选对竹卵圆蝽若虫具有高毒力的致病球孢白僵菌菌株，为竹卵圆蝽的生物防治提供科学依据。 方法 采用组织分离法从竹卵圆蝽僵虫体内分离昆虫病原真菌，通过形态学、DNA条形码相结合的方法对病原真菌进行鉴定，采用生物测定法评价分离真菌菌株的毒力。 结果 从竹卵圆蝽僵虫体内获得7株病原真菌，这些菌株的形态特征、培养性状和ITS rDNA序列均与球孢白僵菌一致，因此，鉴定为球孢白僵菌。室内和林间生物测定结果表明，当分生孢子浓度为10⁸孢子·mL⁻¹时，LYC10、LYC11、LYC15和LYC4菌株对竹卵圆蝽若虫的致死中时间LT₅₀分别为5.04、5.45、6.17和14.03 d；LYC11菌株林间的致死中浓度LC₅₀为2.43 × 10⁴孢子·mL⁻¹。 结论 从竹卵圆蝽僵虫体内分离到7株球孢白僵菌，不同菌株的毒力存在差异，LYC10菌株的毒力最强；LYC11菌株林间的累计死亡率低于室内测定的结果。

目的 对早竹丛枝病进行调查及病原菌分子鉴定，为早竹丛枝病的病害诊断和防治提供科学依据。 方法 采用单株水平和单枝盘水平的2种病害分级标准对早竹丛枝病进行调查。使用植原体16S rDNA和真菌rDNA-ITS序列的特异性PCR引物，对早竹丛枝病的病原菌进行分子鉴定。 结果 调查的6块样地早竹丛枝病的平均发病率为18.59%，平均病情指数为6.67。感病的早竹DNA样品能够扩增出真菌的rDNA-ITS序列，而不能够扩增出植原体的16S rDNA序列；扩增出的序列与报道的竹针孢座囊菌的序列同源性达到99.00%，与其它真菌的序列同源性最高仅为94.00%。 结论 浙江省德清县早竹丛枝病的病原菌为竹针孢座囊菌。

对浙江省德清县早园竹林进行造瘿昆虫危害和虫瘿类型调查,室内解剖和饲养观测虫瘿中的昆虫幼虫及成虫羽化情况. 结果表明:(1)营林方式显著地影响造瘿昆虫2013年的造瘿率,砻糠覆盖样地造瘿率显著低于未覆盖砻糠的样地. (2)整株竹子上共获得349个虫瘿,其中新瘿291个,枯瘿58个;依据虫瘿的形态特征分成联瘿型、叶片型、叶鞘型、光瘿型和顶生型5种类型,其在整株竹子上所占比例分别为40.12%、30.95%、19.77%、6.01%和3.15%. (3)单虫瘿解剖最多可获得6头昆虫的幼虫,而联瘿型、叶片型、叶鞘型、光瘿型和顶生型虫瘿的平均幼虫数分别为1.83、2.88、2.77、1.00和2.27. (4)联瘿型、叶片型和叶鞘型虫瘿羽化出5种301头小蜂,包括竹泰广肩小蜂和刚竹泰广肩小蜂2种造瘿昆虫,栗瘿旋小蜂、点腹刻腹小蜂和纹黄枝瘿金小蜂3种寄生蜂;竹泰广肩小蜂、刚竹泰广肩小蜂和寄生蜂在3种不同类型虫瘿中的比率分别为59:18:1、70:31:2和83:31:6. 研究结果将有助于加深对早园竹虫瘿的认识,并为下一步综合防治和生产实践提供理论依据.

[Objective] The objective of the study is to clarify the characteristics of spatial distribution of Phyllostachys praecox gall under two management patterns. [Methods] Five aggregated indices and an aggregated formula were used to describe the spatial distribution patterns of Ph. praecox gall. The gall distribution under two different management patterns were compared. Through regression analysis, the relationship between the third-level shoots and the number of galls was determined. [Results] Statistical model analysis showed that the gall spatial distribution followed an uniformly aggregated pattern, and the basic components of gall was colony. The reasons for aggregation were the aggregation and characteristics of bamboo gall-makers. On the bamboo plant, significant difference was found in gall density among three layers of bamboo canopy. In rough management plots, the galls were concentrated in the middle layer of the canopy, the height is 3-4 m and 4-5 m sections. In intensively managed plots, the galls were concentrated in the upper layer of the canopy, the height is 2-3m section. In two different management patterns, there is a significant linear regression relation between the number of gall and the nunmber of third-level shoots. [Conclusion] Thespatial distribution of Ph. praecox gall followed an aggregated distribution pattern. There are significant differences in gall density among different heights of bamboo canopy. Management patterns will affect the distribution of gall, while obtruncation will affect the nunmber of third-level shoots. The nunmber of third-level shoots are related to the number of gall.